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Allgemeine Mikrobiologie

Der Entnahmeort sollte möglichst am Ort des Infektionsgeschehens liegen.
Kontamination des Probenmaterials mit Keimen der Standortflora und aus der Umwelt sind zu vermeiden, da die Anwesenheit von Standortflora zu Interpretationsschwierigkeiten führen kann.
Kontakt des Probenmaterials mit Antiseptika und Desinfizientien vermeiden.
Ausreichende Probenvolumina entnehmen, um falsch negative Befunde zu vermeiden.
Der Entnahmezeitpunkt sollte vor Beginn einer antimikrobiellen Therapie liegen, um falsch negative Befunde zu vermeiden; eine lebensrettende Therapie hat allerdings Vorrang und sollte nicht verhindert werden.
Proben und Begleitscheine exakt kennzeichnen: Name, Vorname, Geburtsdatum, Adresse oder Station des Patienten.
Informationen, die für eine adäquate Bearbeitung, Beurteilung und Befundübermittlung erforderlich sind:
Gewünschte Untersuchung, Infektlokalisation (Wundabstrich ist zu pauschal), Verdachtsdiagnose (z.B. Tierbiss), anamnestische Hinweise (z.B. Reiseanamnese), vorherige oder laufende antibiotische Therapie, Immunstatus (Neutropenie), Datum, Uhrzeit der Entnahme des Untersuchungsmaterials, Telefonnummer über die der Befund notfalls mitgeteilt werden kann.
Alle Proben umgehend dem Labor übergeben (optimal innerhalb von 2 h, nicht länger als 24 h), falls dies nicht möglich ist, für eine sachgerechte Zwischenlagerung Sorge tragen.
Alle Materialien sind grundsätzlich als infektiös zu betrachten; sie müssen in sterile, dicht verschließbare und auslaufsichere Gefäße gegeben werden;
der Verdacht auf Erreger mit einem hohen Infektionspotential (Brucellen, außereuropäische Pilze) müssen wegen der Gefahr der Laborinfektion dem Labor mitgeteilt werden.
Für den Postversand müssen bezüglich der Verpackung die entsprechenden Richtlinien berücksichtigt werden.

Untersuchungsmaterial	Transportmedium	Temperatur	Methode der Wahl
Blut für Blutkulturen	direkte Beimpfung	RT	Kultur
Katheterspitzen	in sterilem Gefäß	4° C	Kultur
Liquor	nativ, Kultur ansetzen ≤2 h	RT	Kultur, PCR

Unterer Respirationstrakt¹
Sputum auf Bakterien	nativ	RT	Kultur
Sputum auf Mykobakterien	nativ	4° C	Kultur, PCR
Bronchial- / Trachealsekret / BAL	nativ	RT	Kultur, PCR
Rachenspülwasser	nativ	RT	Kultur, PCR
Aspirate aus der Trachea	anaerobes TM	RT	Kultur

Oberer Respirationstrakt ¹
Aspirate aus Nebenhöhlen	anaerobes TM	RT	Kultur
Material aus Nasopharynx	aerobes TM	RT	Kultur, PCR
Innenohrabstriche	aerobes TM	RT	Kultur
Abstriche bei Otitis externa	aerobes TM	RT	Kultur

Augen
Bindehautabstriche	aerobes TM	RT	Kultur
Augenkammerwasser	nativ²	RT	Kultur

Urogenitaltrakt
Urin	nativ	4° C	Kultur
Dialysat	nativ	4° C	Kultur
Material aus Genitaltrakt	aerobes TM	RT	Kultur
Intraoperatives Material
Intraoperative Materialien	anaerobes TM	RT	Kultur

Gastrointestinaltrakt¹
Stuhl z. Nachweis von:
Salmonellen, Shigellen, Campylobacter, Yersinien und anderen Bakterien	nativ	4° C	Kultur

Sterile Kompartimente
Synovialflüssigkeit ²	nativ	RT	Kultur, PCR
Punktate ²	anaerobes TM	RT	Kultur, PCR
Biopsate	aerobes TM	RT	Kultur
Gewebe	anaerobes TM	RT	Kultur

Verdacht auf Infektionen mit speziellen Erregern
Nachweis von Bordetella pertussis (Keuchhusten)	trockener Abstrichtupfer	RT	PCR
Nachweis von Corynebacterium diphtheriae (Diphtherie)	aerobes TM	RT	Kultur
Nachweis von Neisseria gonorrhoeae	aerobes TM (mit Kohle)	RT	Kultur
Nachweis von Aktinomyzeten	anaerobes TM	RT	Kultur
Nachweis von Anaerobiern	anaerobes TM	RT	Kultu

BAL = broncho-alveoläre Lavage, RT = Raumtemperatur, TM = Transportmedium, PCR = Polymerase Kettenreaktion
¹ Bei längerem Transport (≥ 6 h oder über Nacht) sollte die Lagerung bei 4 °C erfolgen, um ein Überwuchern der ätiologisch bedeutsamen Flora durch Keime der Normalflora zu verhindern. Allerdings besteht dadurch die Gefahr, dass empfindliche Keime absterben.
² Bei längerem Transport empfiehlt sich das Einimpfen in Blutkulturflaschen.

Art des Materials	Gewinnung	Bemerkungen
Bronchoalveoläre Lavage, Bronchialflüssigkeit	Mindestens 10 - 30 ml in sterilem Gefäß auffangen.	Das Bronchoskop darf nicht mit Leitungswasser kontaminiert werden, da dieses nicht tuberkulöse Mykobakterien enthalten kann.
Sputum	Morgensputum, 5 - 10 ml in sterile weitlumige Einmalbehälter an drei aufeinanderfolgenden Tagen.	Personal bzw. Eltern müssen genau über die Sputumgewinnung instruiert sein. Speichel oder Nasenschleim sind ungeeignet. Vor der Sputumproduktion soll der Patient den Mund mit Wasser spülen. Für induziertes Sputum soll sterile hypertonische NaCl-Lösung verwendet werden. Diese Proben sind als „induziert“ zu kennzeichnen.
Bronchialsekret	2 - 5 ml
Magensaft	20 - 30 ml in steriles Behältnis. Magensaft soll morgens unmittelbar nach dem Aufwachen gewonnen werden, um das im Schlaf verschluckte Sputum zu erhalten.	Die Probe muss vor der ersten Aufnahme von Flüssigkeit oder Nahrung entnommen werden. Man verwendet sterile NaCl-Lösung. Die Flüssigkeit muss in ein Gefäß mit einer neutralisierenden Menge von 100 mg Na-Carbonat oder 1 ml Trinatriumphosphat gegeben werden (vom Labor anfordern), damit die Mykobakterien überleben.
Urin	So viel wie möglich (mindestens 30 ml) der ersten morgendlichen Miktion, Mittelstrahl-, Blasenpunktions- oder Katheterurin in sterilem Gefäß auffangen.	An drei aufeinanderfolgenden Tagen gewinnen. Zu anderen Zeiten als nach der Nachtruhe gewonnene Urinproben sind nicht optimal.
Liquor, andere Punktate	Mindestens 5 ml in steriles Röhrchen auffangen; für die PCR zusätzlich 5 ml.	Es sollte so viel Liquor wie möglich dem Labor übergeben werden. Die Mindestmenge von 5 ml ist unbedingt einzuhalten, um ein falsch negatives Ergebnis zu vermeiden!
Pleurapunktat	10 - 30 ml
Gewebe, Biopsate	Wenn möglich 1 g in steriles Gefäß ohne Fixier- oder Konservierungsmittel geben.	Verkäsende Anteile bevorzugen, nicht in NaCl-Lösung geben!
Heparin-Blut	10 ml venöses Blut im Heparinat-Röhrchen zur Durchführung des Quantiferon- oder T-Spot-TB-Tests (IGRA = Interferon-Gamma-Release-Assay).	Immunologischer Test zum Nachweises einer latenten Tuberkulose. Es kann nicht zwischen latenter, frischer oder aktiver Tuberkulose unterschieden werden!

Fragestellung Lokalisation	Erreger und Erregernachweis	Material und Materialgewinnung	Probengefäße und Probenmenge
Harnwegsinfektionen, Cystitis, Pyelonephritis	Kulturell: Aerobe und fakultativ anaerobe grampositive und gramnegative uropathogene Bakterien, Pilze. Auf Anforderung auch obligat anaerobe Bakterien, Mycoplasmen, Ureaplasmen.	Mittelstrahlurin: (möglichst Morgenurin). Nach Reinigung des Orificium urethrae erste Portion ablaufen lassen, aus dem Strahl 10-20 ml in sterilem Gefäß auffangen. Bei Verwendung von Eintauchnährböden: Nährbödenträger eintauchen (keinen Harn im Trägergefäß belassen!) Katheterurin: Erste Portion verwerfen! Dauerkatheter: Entnahme durch Punktion einer gut desinfizierten Stelle im oberen Katheterteil mittels steriler Kanüle. Nicht aus dem Auffangbeutel entnehmen! Blasenpunktionsurin	Ca. 10-20 ml Urin in sterilen Urinbecher ggf. Eintauchnährböden. Bei Urinproben ohne Stabilisator sollte eine Transportzeit ins Labor von 2-4 Stunden nicht überschritten werden.
tiefe Atemwege	Mikroskopisch und kulturell: aerobe und ggf. anaerobe pathogene Bakterien, Spross- und Fadenpilze, Legionellen, Mycoplasmen, Pneumocystis jirovecii.	Sputum, Bronchial-, Trachealsekret, Bronchial-Lavage. Bei Sputum Mund vorher möglichst mit frischem Leitungswasser mehrmals spülen (evtl. Zahnprothese entfernen).	Sputumröhrchen
oberer Respirationstrakt: Tonsillen-, Rachen und Zungenabstrich	Mikroskopisch und kulturell: aerobe pathogene Bakterien, Pilze.	Abstrich	Sterile Abstrichtupfer in Transportmedium
Keuchhusten	Bordetella pertussis; PCR	Rachenabstrich	Abstrichtupfer ohne Transportmedium
Gehörgangsabstrich, Mittelohr- und Nebenhöhlensekrete	Mikroskopisch und kulturell: aerobe und anaerobe pathogene Bakterien, Spross- und Fadenpilze.	Abstrich	Normale oder dünne sterile Abstrichtupfer in Transportmedium
Meningitis	Mikroskopisch und kulturell aerobe und anaerobe pathogene Bakterien, Pilze.	Liquor	Mindestens 2 ml Liquor in sterilem Probenröhrchen, Lagerung bei Raumtemperatur. Bei Lagerung > 2 Std. zusätzlich eine Liquorprobe in eine aerobe Blutkulturflasche geben, Lagerung bei Raumtemperatur.
Augen-, Bindehaut-Erkrankungen	Mikroskopisch und kulturell: aerobe und ggf. anaerobe pathogene Bakterien, Pilze. Chlamydia trachomatis: PCR Herpes simplex-Viren: PCR Adenoviren: PCR	Tränenflüssigkeit, Eiter, Konjunktivalabstrich	Sterile Abstrichtupfer in Transportmedium Sterile Abstrichtupfer ohne Transportmedium
Wundinfektionen	Mikroskopisch und kulturell: aerobe und anaerobe pathogene Bakterien, Pilze.	Nach Möglichkeit Wundsekret, Eiterflüssigkeit oder Gewebeproben, ansonsten Wundabstrich.	Material/Abstrichtupfer in Transportmedium
Infektionen des Urogenitalbereichs	Mikroskopie und Kultur: aerobe und ggf. anaerobe pathogene Bakterien, z. B. Gardnerella, Neisseria gonorrhoeae, Mycoplasmen, Ureaplasmen, Sprosspilze. DNA-Probe: Trichomonaden, Gardnerella, Sprosspilze PCR: Chlamydien, Gonokokken	Sekret, Eiter, Fluo Harnröhren-, Anal- oder Cervixabstrich	Normaler oder dünner steriler Abstrichtupfer in Transportmedium mit Kohle! Oder: beflockter Tupfer in Flüssigtransportmedium Trockener Abstrichtupfer
Gelenkpunktat	Mikroskopisch und kulturell: aerobe und anaerobe pathogene Bakterien, Pilze.	Punktat	Steriles Probenröhrchen, ggf. zusätzliche Beimpfung einer aeroben Blutkulturflasche.
Bakteriämie, Sepsis, Endocarditis	Kulturell: aerobe und anaerobe pathogene Bakterien, Pilze	Venöses (oder arterielles) Blut in Blutkulturflaschen	Blutkulturflaschen nach Vorschrift befüllen, bis zum Transport ins Labor bei Zimmertemperatur aufbewahren (keine Kühlschranklagerung!). Unbedingt Datum und Uhrzeit der Blutentnahme auf der BK-Flasche oder Begleitschein vermerken.
Venenkatheter-Infektion	Kulturell: aerobe und anaerobe pathogene Bakterien, Pilze	Venenkatheterspitzen. Zusätzlich sollten zuvor Blutkulturen über den Katheter und aus einer peripheren Vene gewonnen werden.	Steriles Probenröhrchen Blutkulturflaschen
Gastrointestinale Infektion	Kulturell: Salmonellen, Shigellen, Yersinien, Campylobacter, Kultur und Antigentest: Clostridium difficile-Toxin PCR: enteropathogene Viren Noro-, Rota-, Adeneo-,Astro- und Sapoviren darmpathogene E.coli EHEC, EPEC, EAEC, ETEC	Stuhlprobe, evtl. Mehrfachuntersuchungen an drei aufeinanderfolgenden Tagen; kurzfristige Probenlagerung im Kühlschrank (4-8 °C).	Stuhlröhrchen mit Spatel zur Entnahme von 1-3 haselnussgroßen Proben.
Intestinale Parasitose	Wurmidentifizierung. Mikroskopischer Nachweis direkt und nach MIF-Anreicherung: Wurmeier, Amöbencysten, Cryptosporidien, Lambliencysten, Microsporidien. Nachweis von Oxyureneiern: Abklatschpräparat PCR: Lamblien, Entamocba, Cyclospora, Cryptosporidien, Blastocystis, Dientamoeba	Wurm oder Wurmteile. Stuhlproben (evtl. Mehrfachuntersuchung an drei aufeinanderfolgenden Tagen) Durchsichtigen Tesafilm morgens paraanal aufkleben, entfernen und auf Objektträger kleben.	Geeignetes Gefäß. Stuhlröhrchen mit Spatel, haselnussgroße Stuhlprobe Abklatschpräparat ins Labor einsenden
Galle Duodenalsaft	Mikroskopisch und kulturell aerobe und anaerobe pathogene Bakterien, Lamblien	Gallenblasenpunktat Duodenalsonde	Steriles Probengefäß
Keuchhusten	Bordetella pertussis¸ PCR	Rachenabstrich	Sterile Abstrichtupfer ohne Transportmedium
Tuberkulose, Mykobakteriose	Mikroskopisch und kulturell: Mycobacterium tuberculosis-Komplex und nicht tuberkulöse Mykobakterien (NTM)	Sputum, Bronchialsekret, BAL, Magensaft (abgepuffert), Morgenurin (jeweils 3x), Eiter, Liquor, Punktate, Stuhl, Gewebe, Menstrualblut	Sterile Probengefäße
Dermatophyten	Mikroskopisch, kulturell, PCR Trichophyten, Mikrosporidien, Epidermophyten	Hautschuppen, Haare, Nagelspäne, Nägel	Sterile Probengefäße
Schimmelpilze	Mikroskopisch und kulturell	Sputum, Bronchialsekret, Abstrich Ohr, Nasen-Nebenhöhle, Hautschuppen	Sterile Probengefäße oder Transportmedium
Sprosspilze	Mikroskopisch und kulturell	Sputum, Bronchial-, Trachialsekret, Rachen-, Nasen-, Ohr-, Zungen-, Vaginal-, Urethralabstrich, Harn, Stuhl, Eiter	Sterile Probengefäße oder Transportmedium
Dimorphe Pilze	Kulturell Blastomyces, Coccidioides, Histoplasma	Sputum, Bronchial-, Trachialsekret, Hautmaterial, Eiter	Sterile Probengefäße oder Transportmedium

Parasiten
Acanthamoeba	Mikroskopie, PCR	Liquor, Konjunktivalabstrich, Kontaktlinsen	Sterile Probengefäße
Bilharziose	Mikroskopisch (Eier): Schistosoma haematobi Schistosoma mansoni / japonicumm	Urin gewonnen zwischen 12-14 Uhr, nach körperlicher Belastung. Stuhl	10-20 ml Urinbecher Stuhlröhrchen mit Spatel
Entamoeba histolytica/dispar	Cystennachweis nach MIF-Anreicherung; PCR	Stuhl	Stuhlröhrchen mit Spatel (haselnussgroße Stuhlprobe)
Cryptosporidien	PCR, Mikroskopie	Stuhl	Stuhlröhrchen (haselnussgroße Stuhlprobe)
Lamblien	PCR, Mikroskopie	Stuhl, Duodenalsaft	Stuhlröhrchen (haselnussgroße Stuhlprobe)
Leishmanien	Mikroskopisch im Blut, Biopsie (Knochenmark, Milz, Lymphknoten)	EDTA-Blut oder Biopsat	EDTA-Röhrchen oder steriles Probengefäß
Microsporidien	Mikroskopisch, PCR	Stuhl	Stuhlröhrchen (haselnussgroße Stuhlprobe)
Pneumocystis carinii	PCR	Bronchiallavage, Trachealsekret, ggf. provoziertes Sputum	Geeignetes Probengefäß, Sputum-Röhrchen
Wurmeier	Mikroskpisch nach MIF-Anreicherung	Stuhl	Stuhlröhrchen (haselnssgroße Stuhlprobe)
Würmer	Makro- und mikroskopisch	Wurm oder Proglottiden, Stuhl	Geeignetes Gefäß

Überprüfung von Dampf- und Heißluftsterilisatoren mittels Bioindikatoren.
(Der Einsatz von biologischen Bioindikatoren ist nur eine Ergänzung und kein Ersatz für eine Validierung.)
Verfahren zur Funktionsprüfung von Reinigungs- und Desinfektionsgeräten (RDG) mittels Bioindikatoren
(Steckbecken; Instrumente/chirurgische Instrument und Anästhesiezubehör; Chemo- Thermische Wäschedesinfektion von Textilien)
Hygienisch-mikrobiologische Kontrolle von flexiblen Endoskopen und endoskopischen Zusatzinstrumenten
Probenahme in der Praxis:
Hygienisch-mikrobiologische Überprüfung der Aufbereitung von Koloskopen in der Praxis/Klinik (nach Qualitätssicherungsvereinbarung zur Koloskopie von 24.07.2006)

Punkt 1-3: Eine Überprüfung erfolgt je Gerät/Programm.
Überprüfung von Oberflächen in Raumlufttechnischen Anlagen (RLT) mittels Abklatschverfahren.

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VERSAND UND LAGERUNGSBEDINGUNGEN FÜR BAKTERIOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN

ABNAHME, TRANSPORT UND LAGERUNG VON MATERIALIEN ZUM NACHWEIS VON MYKOBAKTERIEN

SPEZIELLE MIKROBIOLOGIE

HYGIENE - HINWEISE