Autoimmundiagnostik

Die IFT ist ein häufig verwendeter mikroskopischer Test zum Nachweis von Autoantikörpern (AAk) im Patientenserum. Die AAk richten sich gegen bestimmte Antigene von Zellen oder Geweben. Der Test basiert auf histologischen Präparaten (Zellkulturen oder Gewebeschnitte, wie z.B. Rattenleber), die auf einem Objektträger aufgebracht wurden. Im Labor wird das zu untersuchende Patientenserum auf das entsprechende Präparat gegeben. Bei Patientenproben, welche den nachzuweisenden AAk enthalten, binden sich diese an die auf dem Objektträger aufgebrachten Zell- bzw. Gewebeantigene. Nicht-gebundene Antikörper werden durch Waschschritte entfernt. Um die gebundenen AAk zu identifizieren und zu beurteilen, müssen sie für die Fluoreszenzmikroskopie sichtbar gemacht werden. Das erfolgt durch die Zugabe eines Fluorochrom-markierten Anti-Human-Antikörpers. Jeder gebundene AAk zeigt ein typisches Fluoreszenzmuster, je nach Lokalisation der einzelnen Antigene. Für eine Konzentrationsangabe der AAk werden die positiven Proben stufenweise verdünnt (austitriert) und im Befund mit dem Endtiter angegeben (z.B. 1:320).
Der Vorteil der IFT im Vergleich zum ELISA besteht in dem breiten Antigenspektrum der Ausgangssubstrate in ein und demselben Analyseansatz. Auf diese Weise können eine Vielzahl von verschiedenen Antikörperspezifitäten erfasst und eine hohe Trefferquote erzielt werden.

Mit dem immunologischen Nachweisverfahren ELISA (Enzyme-linked immunosorbent-assay) können Autoantikörper (AAk) semiquantitativ und quantitativ nachgewiesen werden. Bei semiquantitativen Tests wird ein Antigengemisch verwendet. Daher muss bei positiven Ergebnissen anschließend die Antikörperspezifität durch einen monospezifischen Test untersucht werden.

Wie aus der Bezeichnung „ELISA“ hervorgeht, ist eine Komponente (in diesem Fall das Antigen) an einer festen Phase adsorbiert und der Sekundär-Ak enzymatisch markiert. Positive AAk im Untersuchungsmaterial (z.B. Serum) binden an das Festphase-gebundene Antigen. Nicht-gebundene Antikörper werden durch Waschschritte entfernt. In der darauf folgenden Inkubation bindet der Sekundär-Ak spezifisch an die nachzuweisenden Patienten-AAk. Über das an den Sekundär-Ak gekoppelte Enzym wird eine Substratreaktion ausgelöst, die zu einer messbaren Farbänderung führt. Die photometrisch gemessene Färbung korreliert mit der Konzentration der gebundenen Antikörper.

Der RIA (Radioimmunassay) gehört auch zu den Immunassay-Verfahren, basiert aber im Unterschied zum ELISA nicht auf einer enzymatischen Farbreaktion, sondern auf einer Quantifizierung der radioaktiv-markierten Sekundärantikörper.

Der Immunoblot/Lineassay dient in der Autoimmundiagnostik ebenfalls dem Nachweis von Autoantikörpern (AAk) über eine Antigen-Antikörper-Interaktion. Ähnlich dem ELISA werden hier die spezifischen Antigene auf eine Festphase aufgetragen. Als Festphase dient in diesem Fall ein Membranstreifen, auf den das zu untersuchende Patientenserum aufgebracht wird. Bei positiven Patientenproben binden die nachzuweisenden AAk spezifisch an die Festphasen-gebundenen Antigene. Zur Visualisierung der gebundenen Patienten-AAk wird ein Sekundär-Ak benutzt, der wie beim ELISA mit einem Enzym gekoppelt ist. Über das Enzym wird eine Farbreaktion ausgelöst, die als positives Signal auf dem Membranstreifen erscheint. Das heißt, wenn spezifische Antikörper im Serum des Patienten vorhanden sind, erscheint eine dunkle Linie an der jeweiligen Antigen-Position. Der Vorteil von Immunoblots/Lineassays ist die gleichzeitige Analyse mehrerer Antikörper simultan in ein und demselben Testansatz. Der Nachteil zum ELISA ist die in der Regel fehlende Möglichkeit der exakten Quantifizierung der Antikörper (meist nur qualitative Aussage).